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農(nóng)藥殘留的兩種主要檢測(cè)方法講解

  • 發(fā)布日期:2020-09-27      瀏覽次數(shù):13582
    • 農(nóng)藥殘留主要檢測(cè)方法有兩種:

       

      1.色譜檢測(cè)法:

      色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析,可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。色譜法(包括氣相色譜、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用等)。

      優(yōu)點(diǎn):靈敏度高、準(zhǔn)確、定性定量;

      缺點(diǎn):成本高、操作復(fù)雜、時(shí)間較長(zhǎng)。

       

      2.速測(cè)儀法:

      速測(cè)儀法只能作為農(nóng)殘定性分析,易于在基層推廣等特點(diǎn),是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法,也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用*廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。

       

       

      速測(cè)儀法的主要優(yōu)點(diǎn):

      1、該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)便、成本較低等優(yōu)點(diǎn),適用于現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定,特別適合在蔬菜生產(chǎn)基地、批發(fā)市場(chǎng)及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門(mén)開(kāi)展快速檢測(cè)工作。

      2、該方法可對(duì)有農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩,將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場(chǎng)之外,避免因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。

       

      速測(cè)儀法的主要缺點(diǎn):

      1、酶試劑易失活,導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定,檢測(cè)結(jié)果誤差較大,重復(fù)性不好,實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%~70%左右;

      2、存在檢測(cè)盲區(qū),只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥,不能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥;

      3、不適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品。

       

      速測(cè)儀的檢測(cè)方法有兩種:

      1、速測(cè)卡法(紙片法)

      試劑

      固有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片(速測(cè)卡),pH7.5緩沖液溶液:分別取15.0g磷酸氫二鈉與1.59g無(wú)水磷酸二氫鉀用500mL蒸餾水溶解。

      儀器

      常量天平   

      有條件配備37℃±2℃恒溫裝置。

      分析步驟

      整體測(cè)定法

      表面測(cè)定法(粗篩法)

      結(jié)果判定:

      1、結(jié)果以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制(為陽(yáng)性)、未抑制(為陰性)表示。

      2、與空白對(duì)照卡比較,白色藥片不變色或略淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同,為陰性結(jié)果。

      3、對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品,可用其他分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

      速測(cè)卡法(紙片法)注意事項(xiàng)

      1、有些蔬菜如生姜、蔥、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破壞酶活性或者使藍(lán)色產(chǎn)物褪色的物質(zhì),處理這類蔬菜時(shí),不要讓其汁液太多釋放出來(lái),不要剪得太碎,浸提時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng),必要時(shí)可采用整枝蔬菜浸提或采用表面測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜,也可以采取整株(體)蔬菜浸提的方法,減少色素的干擾。

      2、試紙上的提取液不可太多而溢出試紙,亦不可太少而使反應(yīng)不*。

      3、*好將每一批樣品處理好后一起加樣,一面時(shí)間過(guò)長(zhǎng)蒸干。

      4、當(dāng)溫度條件低于37℃,酶反應(yīng)的速度隨之放慢,藥片加液后放置反應(yīng)的時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng),延長(zhǎng)時(shí)間的確定,應(yīng)以空白對(duì)照卡用(體溫)手指捏3分鐘時(shí)可以變藍(lán),即可往下操作。注意樣品放置的時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照卡放置的時(shí)間一致才有可比性。

      5、空白對(duì)照卡不變色的原因:一是藥片表面緩沖溶液加的少,預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕潤(rùn),二是溫度太低。

      6、如有條件,將農(nóng)藥速測(cè)卡放在10℃以下保存效果會(huì)更好,每小包產(chǎn)品開(kāi)封后*好在三天內(nèi)用完,如用不完,可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封保存,如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥測(cè)速卡的紅色藥片由鮮紅橙色變?yōu)榘档暮旨t色,說(shuō)明紙片已吸潮失效。

      2、酶抑制率法(分光光度法)

      根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲(chóng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累,影響正常傳導(dǎo),導(dǎo)致昆蟲(chóng)中毒致死的原理而設(shè)計(jì)。如果蔬菜中不含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,乙酰膽堿酶水解后,水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色。如果蔬菜中含有可以抑制乙酰膽堿的活性的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,這種酶就不能被水解,從而無(wú)顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酶和顯色劑,用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。

      試劑

      1.pH8.0緩沖溶液:分別取11.9g無(wú)水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀,用1000mL蒸餾水溶解。

      2.顯色劑:分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸氫鈉,用20m了緩沖溶液溶解,4℃冰箱中保存。

      3.底物:取25.0mg硫代乙酰膽堿,加3.0mL蒸餾水溶解,搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩14嫫诓怀^(guò)兩周。

      乙酰膽堿酯酶:根據(jù)酶的活性情況,用緩沖溶液溶解,3min的吸光度變化ΔAo值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?,保存期不超過(guò)四天。

      可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的ΔAo值應(yīng)控制在0.3以上。

      儀器

      1.分光光度計(jì)或相應(yīng)測(cè)定儀及常量天平。

      2.分析步驟

      樣品處理:選取有代表性的蔬菜樣品,沖洗掉表面泥土,剪成1cm左右見(jiàn)方碎片,取樣品1g,放入燒杯或提取液瓶中,加入5mL緩沖溶液,振蕩1-2min,倒出提取液,靜置3~5min,待用。

      對(duì)照溶液測(cè)試:先于試管中加入2。5mL緩沖溶液,再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑,搖勻后于37℃放置15min以上(每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致)。加入0.1mL底物搖勻,此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng),應(yīng)立即放入儀器比色池中,記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAo。

      樣品溶液測(cè)試:先于試管中加入2.5mL樣品提取液,其他操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同,記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAt。

      結(jié)果的表述計(jì)算

      1、檢測(cè)結(jié)果按公式計(jì)算:

      2、抑制率(%)=[(ΔAo-ΔAt)/ΔAo]×100

      3、式中:ΔAo…對(duì)照溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值:

      4、ΔAt…樣品溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值:

      結(jié)果判定

      1、結(jié)果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí),表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在,樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陰性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品,可用其他方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

       

      深圳市芬析儀器制造有限公司生產(chǎn)的CSY-N10新一代智能型農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀;是根據(jù)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法(NY/T 448-2001)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T5009.199-2003)中的酶抑制率法,嚴(yán)格遵循《GB/T5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)》中的規(guī)定對(duì)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。深芬儀器農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀廣泛應(yīng)用于各級(jí)政府蔬菜檢測(cè)中心、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市、環(huán)保機(jī)構(gòu)、蔬菜種植基地、飯店、車載及實(shí)驗(yàn)室等食品安全檢測(cè)與監(jiān)控場(chǎng)所等單位對(duì)果蔬中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。能準(zhǔn)確、快速檢測(cè)出蔬菜、水果、糧食、茶葉以及土壤中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。

       

      酶抑制率法注意事項(xiàng)

      1、蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中,含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類樣品時(shí),可采取整株(體)蔬菜浸提。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜,也可采取整株(體)蔬菜浸提方法,減少色素的干擾。

      2、當(dāng)溫度條件低于37℃,酶反應(yīng)的速度隨之放慢,加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng),延長(zhǎng)時(shí)間的確定,應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min的吸光度變化ΔAo值在0.3以上,即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液放置時(shí)間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對(duì)照溶液3min的吸光度變化ΔAo值<0.3的原因:一是酶的活性不夠,二是溫度太低。

      3、當(dāng)吸光度大到無(wú)法讀取時(shí),說(shuō)明測(cè)定液渾濁有干擾。

      4、待測(cè)樣品放入分光光度計(jì)速度的影響。待測(cè)樣品加入底物后,應(yīng)馬上搖勻,放入測(cè)定儀,否則影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

      5、比色杯的透光度影響。保持比色杯的清潔,使比色杯有好的透光度是減少檢測(cè)誤差的必要性。比色杯可定期用乙醇進(jìn)行清洗。

      6、微量移液器的影響。微量移液器要,貼上標(biāo)簽,避免交差使用造成實(shí)際污染:堅(jiān)持只吸不進(jìn)的原則,防止試劑污染。

      7、藥品配制過(guò)程中的影響。磷酸鹽緩沖液的配制一定要用蒸餾水、純凈水或者離子水,不可使用礦物質(zhì)水,否則在測(cè)量過(guò)程中干擾較大,影響準(zhǔn)確性。